DIVISIÓN NEUROBIOLOGÍA MOLECULAR
EQUIPO
Dra. Irene Szijan (PhD), Jefe
a cargo
Profesora Regular Adjunta con dedicación exclusiva de
Genética y Biología Molecular - Facultad de Farmacia y Bioquímica -
UBA
Investigadora Independiente CONICET
Directora del Laboratorio de Neurobiología Molecular.
Florencia
Gilberto
Bioquímica
Jefe de Trabajos Prácticos (dedicación
exclusiva) - Facultad de Farmacia y Bioquímica - UBA
Docente e Investigadora
Tesista.
Viviana
Dalamon
Bioquímica
Becaria - CONICET
Jefe de Trabajos
Prácticos (ad-honorem) - Facultad de Farmacia y Bioquímica - UBA Docente e
Investigadora
Tesista.
Verónica
Ferreiro
Bioquímica
Ayudante primera (dedicación semiexclusiva) -
Facultad de Farmacia y Bioquímica - UBA
Investigadora y
docente.
Dra. Marcela Ferrer (PhD)
Investigadora Adjunta con dedicación exclusiva – CONICET
Investigadora y
docente.
FUNCIONAMIENTO Y OBJETIVOS
El grupo de Neurobiología Molecular se dedica al estudio y diagnóstico de las siguientes enfermedades:
1. Mutaciones en genes supresores: NF1 y NF2 en tumores del SNC.
2. Mutaciones responsables de pérdida de función en proteína de retinoblastoma;
3. Alteraciones de impronta genética en los síndromes de Prader-Willi y Angelman;
4. Mutaciones en distrofina que producen la distrofia muscular de Duchenne.
El objetivo es el estudio molecular de las enfermedades nombradas para aclarar su mecanismo, establecer un diagnóstico seguro y detectar portadores de dichas enfermedades.
El cáncer es una enfermedad genética que se origina por cambios en el ADN. Hay dos mecanismos para conducir a una proliferación incontrolada: 1. Convertir en hiperactivo un gen estimulador o oncogén; 2. Inactivar un gen inhibidor o supresor tumoral (Cavenee et al. 1983). Una alteración no es suficiente en general para el desarrollo tumoral, deben ocurrir pérdidas en varios loci y/o activación de oncogenes.
Los tumores del SNC son frecuentes pero sus bases moleculares no se conocen bien. La neurofibromatosis 1 (NF1) y la neurofibromatosis 2 (NF2) son enfermedades genéticas en las cuales los individuos afectados desarrollan tumores nerviosos, generalmente benignos. Los tumores más comunes en NF1 son gliomas y neurofibromas en la vía óptica. Las características de NF2 son: pérdida auditiva y cataratas y los tumores más frecuentes son schwannomas y meningiomas. Los diagnósticos de NF1 y NF2 se basan en criterios clínicos y análisis moleculares de segregación de polimorfismos y la identificación de la mutación por análisis de secuencia.
El retinoblastoma (RB), tumor maligno causado por dos mutaciones en el locus RB1 en 13q14. Codifica para proteína reguladora del ciclo celular y su ausencia lleva a una proliferación descontrolada. La identificación del alelo mutado del gen de retinoblastoma (RB1) se hace por: 1. Ensayo de pérdida de heterozigosidad (LOH) en el tumor utilizando 3 marcadores polimórficos; 2. Identificación de las mutaciones por el análisis de secuencia.
La impronta genética regula la expresión de genes según su origen paterno o materno. La expresión de genes en organismos superiores puede ser afectada por la metilación del ADN, esto está relacionado con la impronta genética. La pérdida de impronta puede llevar a carcinogénesis. Alteraciones en impronta pueden generar también un desarrollo deficiente. Las enfermedades de Prader-Willi (PWS) y Angelman (AS) presentan desórdenes graves generalizados con retardo mental y se originan por una alteración en 15q11-13: inactivación de copia paterna en los enfermos con PWS y de copia materna en los enfermos con AS. Los ensayos moleculares para el diagnóstico consisten en estudiar el estado de metilación en15q11-13 y permiten revelar una alterada expresión genética.
La identificación de las deleciones en la distrofina permite establecer un diagnóstico seguro de la enfermedad de Duchenne con su patrón de herencia característico y determinar el pronóstico de Duchenne o Becker (más leve). El diagnóstico molecular de portadoras se realiza mediante un estudio indirecto de segregación de alelos de microsatélites intragénicos Las alteraciones en gen de distrofina también pueden originar retraso en el desarrollo mental. El gen de distrofina codifica para varias proteínas, isoformas de la distrofina, usando promotores alternativos. La DP140, con promotor en el intrón 44, se expresa específicamente en SNC (Lidov et al. 1995). Los resultados preliminares sugieren una relación entre las mutaciones en la región 3´del gen distrofina y defectos en el desarrollo del SNC.
TECNOLOGÍA DE LA DIVISIÓN NEUROBIOLOGÍA MOLECULAR
- Extracción y purificación de ácidos nucleicos
- Southern y Northern blott
- PCR y RT-PCR
- Análisis de microsatélites
- Análisis de secuencia.
ACTIVIDADES ACADÉMICAS
· Dictado de las asignaturas de grado:
- Elementos de Genética y Biología Molecular en el ciclo de Bioquímica.
- Genética y Biología Molecular en el ciclo de las orientaciones de la carrera de Bioquímica.
- Cursos de postrado:
- Biología Molecular Diagnóstica (Teórico-practico, 35hs).
- Biología Molecular Cáncer. Aplicaciones clínicas (Teórico, 24 hs).
Actividades de investigación
1.Determinación del significado biológico de alteraciones en los genes supresores en tumores del SNC:
El gen supresor de tumores NF1 codifica para la proteína neurofibromina, se encontró mutado en tumores asociados a neurofibromatosis 1 .El gen NF2, también supresor de tumores, codifica para una proteína (merlina) relacionada a la interacción entre citoesqueleto y membrana y se encontró alterado en algunos tumores asociados a neurofibromatosis 2.
Nuestro objetivo es analizar las mutaciones y pérdidas alélicas en los genes NF1 y NF2 en tumores esporádicos del SNC.
2. Estudio de mutaciones en el gen RB1 en familias afectadas con retinoblastoma:
Identificación de los grandes rearreglos en el gen y de las pequeñas mutaciones, responsables ambas de la pérdida de función de la proteína pRB en pacientes con retinoblastoma.
3. Determinación del estado de metilación en el locus 15q11-13 en pacientes con PWS/AS: Existe metilación diferencial del DNA en la región del cromosoma 15q11-13 donde están localizados los genes SNRPN, pequeña ribonucleoproteína N para el“splicing” de los mRNA y UBE3A, cuyo producto interviene en la ubiquitinación de proteínas. El homólogo materno de SNRPN es metilado e inactivo, mientras que el homólogo paterno no está metilado y es transcripcionalmente activo, su inactivación produce el PWS. La proteína de UBE3A se expresa a partir del alelo materno y su deleción conduce a AS. Se determinará el estado de metilación en el locus 15q11-13 de pacientes con sintomatología clínica de PWS o AS, indicativo de la expresión genética y se analizarán marcadores polimórficos para determinar si la inactivación genética se debe a una deleción o disomía uniparental.
4. Estudio de deleciones en el gen de distrofina y detección de portadoras de la enfermedad de Duchenne:
Se analizan las deleciones y los microsatélites en el gen de distrofina en pacientes con distrofia muscular de Duchenne y sus familiares para la detección de portadores de la enfermedad. Se determina también si existe una relación entre el retraso en la maduración del SNC y las deleciones localizadas en la región que codificada la isoforma de distrofina Dp140, que se expresa en el SNC.
CONSULTAS
División Neurobiología Molecular
Piso 4
Sala 5. Hospital de Clínicas “José de San Martín”
Lunes a viernes.
Horario: 10ºº–17ºº hs.
Tel: 5950-8805 , 4964-8296
Directora
Dra. Irene Szijan
E-mail:
iszijan@ffyb.uba.ar
Distrofia muscular de
Duchenne
Bioquímica Florencia Gilberto
Bioquímica Verónica
Ferreiro
E-mail: fgilibert@ffyb.uba.ar
Retinoblastoma
Bioquímica Viviana
Dalamon
E-mail: vdalam@ffyb.uba.ar
Neurofibromatosis 1
Bioquímica Verónica
Ferreiro
E-mail: vferreiro@ffyb.uba.ar
Neurofibromatosis 2
Dra. Marcela
Ferrer
E-mail: marmafec@yahoo.com.ar
Enfermedad de Prader-Willi y Sídrome de
Angelman
Dra. Marcela FERRER
E-mail: marmafec@yahoo.com.ar
